Fixiert wurden die zurecht geschnittenen Stücke von Spross (einjährig), Blattstiel, Blattspreite und eine Blüte für drei Tage in AFE (Wechsel der Fixierlösung nach 48 Stunden).
Der anschließende Schnitt der Proben - mit Ausnahme der Blüte - erfolgte mit dem
Handzylindermikrotom und Leica Einmalklingen im Halter. Dabei erwies sich der Spross wegen seiner hohen Elastizität als schwer zu schneiden, auch eine Möhreneinbettung führte nicht zu optimalen Schnitten. Der Blattstiel konnte hingegen frei stehend ohne Probleme geschnitten werden, ebenso die Blattspreite in der
Möhrenzange mit einer kleinen Kerbe für die Hauptader.
Die Schnittdicke beträgt beim Spross ca. 60 µm, bei Blattstiel und -spreite ca. 50 µm.
Gefärbt wurde nach dem bekannten Rezept für die
Wacker W3A Färbung im Uhrglas (Eckhardschen Uhrglasmethode):
- Acridinrot (1%ige Lösung in Ethanol 50%, 8 Minuten),
- Acriflavin (1%ige Lösung in Aqua dest., 30 Sekunden) und
- Astrablau (1%ige Lösung in Aqua dest., 1 Minute)
Dem letzten Färbegang wurde natürlich wieder das berühmte Quäntchen Acriflavin beigesetzt.
Nach gutem Wässern wurde dann über reines Isopropanol als Intermedium (min. drei mal wechseln zum Entwässern der Schnitte) in Euparal eingedeckt.
Die Schnitte der Blüte sind 10 µm dick und wurden in klassischer Paraffineinbettung mit dem
Rotationsmikrotom geschnitten. Die Färbungen erfolgten an den aufgeklebten Schnitten auf dem Objektträger. Dazu wurde zunächst das Paraffin mittels Xylol aus dem Schnitt gelöst (Auftropfen und ca. 3 Minuten einwirken lassen, dann mehrmals mit Xylol abspülen). Danach wurden die Schnitte mit einer absteigenden Alkoholstufe in destilliertes Wasser überführt - auch wieder in Einzelarbeit direkt auf dem Objektträger, wie auch die nachfolgenden Färbeschritte:
Etzold FCA:
- Einwirkzeit der Farblösung ca. 7 Minuten mit einmaligem leichten Erhitzen
- Ausspülen mit destilliertem Wasser
Wacker W3A:
- Ende der Alkoholstufe bei 50%
- Färbung mit Acridinrot 1% in Ethanol 50% für ca. 8 Minuten
- Färbung mit Acriflavin 1% in Aqua dest. für ca. 30 Sekunden
- Färbung mit Astrablau 2% in Aqua dest für ca. 60 Sekunden
- Zwischen den Färbegängen und nach der letzten Färbung wurde gut mit destilliertem Wasser gespült.
Anschließendes Entwässern mit reinem Isopropanol und Eindecken in Euparal beendet die Präparation.