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W3Asim II im Vergleich - Methoden und Ergebnisse

Jörg Weiß, vom 01.03.2014

Viele Leser kennen sicher den Artikel zu den W3Asim - Fär- bungen [1] von Rolf-Dieter Müller weiter unten hier in der Bibliothek Botanische Mikrotechnik. Die Variante W3Asim I ist mit Astra- blau angesetzt und ähnelt von den Farbstoffen und der Farbwirkung her der original W3A Färbung von Robin Wacker - nur dass sie in einem simultanen Färbegang genau so einfach zu erstellen ist, wie die Färbungen der Etzold-Familie.
In der W3Asim II Färbung kommt hingegen - bei ansonsten gleichen Bestandteilen und ebenso einfacher Anwendung - der Farbstoff Alcianblau zum Einsatz. Hier geht die Farbwirkung eher ins Grünliche. Mit dieser zweiten Variante möchte ich mich heute beschäftigen.

Für W3Asim II gibt es drei Stammlösungen für die 3 Farbstoffe Alcianblau, Acriflavin und Acridinrot, die zur Herstellung der Färbelösungen dienen. Dabei sind die fertigen Färbelösungen genau so stabil, wie die Stammlösungen, sodass diese mit den entsprechenden Mengen auch direkt angesetzt werden können.

Die Rezepte zu den Stammlösungen

Das Thymol dient der Stabilisierung und erhöht die Haltbarkeit, da die Lösungen nicht so schnell verpilzen.

Alcianblau 0,2%
- 0,2 g Alcianblau
- Einige Kristalle Thymol
- 2 ml Essigsäure 99%
- 98 ml Aqua dest.
Alcianblau löst sich relativ schlecht in Wasser.

Acriflavin 1%
- 1,0 g Acriflavin (Chroma)
- Einige Kristalle Thymol
- 2 ml Essigsäure 99%
- 98 ml Aqua dest.

Acridinrot 1%
- 1,0g Acridinrot (Chroma)
- Einige Kristalle Thymol
- 2 ml Essigsäure 99%
- 98 ml Ethanol 50%

Die Farbstoffe werden am besten in die sauberen und trockenen Aufbewahrungsflaschen der Stammlösungen eingewogen (Tara-Funktion der Waage). Anschließend erfolgt die Zugabe des Wassers bzw. des Ethanols und der Essigsäure. Dann dicht verschließen und gut schütteln. Anschließend kann das Thymol zugegeben werden. In den nächsten Stunden mehrmals gut umschütteln, bis die Farbstoffe komplett gelöst sind. Filtern erübrigt sich nach meiner Erfahrung.

Rolf-Dieter Müller hat in seinem Artikel ausgehend von den Stammlösungen zwei Rezepte für die Zusammensetzung der Färbelösung angegeben, von denen das zweite einen deutlich erhöhten Anteil an Alcianblau enthält und von ihm für frische, Schnittfixierte Präparate vorgesehen ist. Hier die zugehörigen Rezepte, die nachher bei den Testfärbungen zur Anwendung kommen.

Ansatz 1 - W3Asim II

Diese Mischung verwende ich regelmäßig in meinen Färbungen, ich nenne sie wie bisher einfach W3Asim II.

- 120 ml Aqua dest,
-   80 ml Alcianblau 0,2%,
-   20 ml Acridinrot 1,0%,
-   20 ml Acriflavin 1,0%
Ergeben 240 ml Farblösung. Das Verhältnis ist 6:4:1:1 - falls jemand 240 ml zu viel sein sollten.

Ansatz 2 - Asim II

Diese Mischung hat Klaus Herrmann dieser Tage auf Basis von Rolf-Dieter Müllers Vorschrift frisch angesetzt und beim Workshop in Darmstadt vorgestellt, wo wir sie gleich ausprobiert haben.
Zur Unterscheidung vom W3Asim II hat er sie Asim II getauft und ich verwende den Namen hier gerne weiter.

- 90,0 ml Alcianblau 0,2%,
- 5,0 ml Acridinrot 1,0%,
- 3,5 ml Acriflavin 1,0%,
- 1,0 ml Essigsäure 99%
Ergeben rund 100 ml Farblösung.

Wie unterscheiden sich nun die beiden Lösungen? Das sehen wir uns nun ein wenig genauer an. Klaus hatte die Probe bereits an Schnitten der Korea-Tanne (Abies koreana) durchgeführt und war so freundlich, seine Testpräparat mit mir zu tauschen. Somit hätten wir ein Beispiel für eine Gymnosperme.
Nun also noch eine Angiosperme. Da ich meinen eigenen W3Asim II Ansatz Ende letzten Jahres an Sprossquerschnitten des Chinesischen Blauregens (Wisteria sinensis, eine Beschreibung findet sich hier) getestet habe und Bodo Braunstorfinger so freundlich war, mir reichlich von seinen 30µm - Schnitten in Ethanol zu überlassen, bietet sich hier eine gute Möglichkeit, mit dem gleichen Material zu testen und auf die bereits erstellten W3Asim II - Präparate zurück zu greifen.

Die verwendeten Sprossquerschnitten - mit Beschriftung

Die Bearbeitung der Schnitte für die Testreihen folgt den bekannten Vor- schriften und ist für alle Proben identisch:

- Fixierung in AFE
- Spülen und ggf. Lagern in Ethanol 70%
- Vor dem Färben schrittweises Überführen in Aqua dest.

- Färbung nach einer der unten beschriebenen Methoden

- Nach dem Färben gründliches Spülen mit Aqua dest.
- Entwässern in Isopropanol 100%
- Eindecken in Euparal

Ein Bleichen (Eau de Javele oder Klorix 1:4) oder Differenzieren (Salzsäure-Alkohol, Stufenweises Entwässern über Ethanol oder einfach nur längere Liegezeiten in reichlich Aqua dest.) war hier nicht notwendig und wurde auch nicht durchgeführt. Beide Arbeitsschritte haben natürlich ebenfalls Auswirkungen auf die Farbwirkung.

Der Vergleich

Die folgenden Färbevorschriften werden nun miteinander verglichen:

1. W3Asim II für 7 Minuten ohne Erwärmen (W3Asim II kalt)
2. Asim II für 20 Minuten ohne Erwärmen (Asim II lang)
3. Asim II für 5 Minuten mit einmaligem Erwärmen (bei Klaus auf 50°C, bei mir bis kurz vor dem Sieden - Asim II heiß)

Die Darstellung der Ergebnisse erfolgt zunächst in einem Übersichtsbild mit allen drei Varianten, immer in der oben beschrieben Reihenfolge (1. W3Asim II kalt, 2. Asim II lang, 3. Asim II heiß) von links nach rechts bzw. von oben nach unten. Darunter finden Sie jeweils eine kleine Galerie mit den kompletten Aufnahmen zu den Färbungen.

Zunächst die Korea Tanne

Die Präparate, die den folgenden Bildern zugrunde liegen, stammen von Klaus Herrmann.

Kollenchym und Periderm der Korea Tanne

Bild 4: Von links nach rechts: 1. W3Asim II kalt, 2. Asim II lang, 3. Asim II heiß. Das Periderm nimmt von links nach rechts immer weniger Farbe an, interessant, dass dies sogar für die erhitzte Probe ganz rechts gilt. Im Kollenchym ist eine Veränderung vom grünlichen ins bläuliche zu erkennen.