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Eine schöne Dreifachfärbung mit Safranin-Astrablau-Chrysoidin (SAC-Färbung)

Sprossquerschnitt der Gemeinen Berberitze (Berberis vulgaris), gefärbt mit der SAC-Färbung. Präparation und Aufnahme von Rolf-Dieter Müller.
Rolf-Dieter Müller, vom 01.11.2011

Vor genau zwei Jahren fand sich über persönliche Bekanntschaften ein Freundeskreis zur botanischen Mikro- technik und wir zeigten uns unsere Schnitte und Färbungen, gaben uns Tipps und stellten Mikroaufnahmen unserer Präparate auf eine eigens dafür geschaffene Webseite.
Den Freundeskreis gibt es noch, die Webseite nicht mehr und so hat mich unser Administrator gebeten, die seinerzeit von mir zusammengestellte Drei- fachfärbung Safranin-Astrablau-Chrysoidin noch einmal zu beschreiben, damit sie für jeden Interessierten zugänglich wird.
Eigentlich ist im Arbeitsplan alles beschrieben: der Färbeprozess mit den not- wendigen Reagenzien und Rezepturen. Doch sollten einige Anmerkungen hierzu den Zugang zur Färbung erleichtern.
Die verwendeten Farbstoffe sind klassisch und besonders wird die Kombination Safranin für die Anfärbung von lignifizierten Zellwänden und Astrablau für die Anfärbung von nicht lignifizierten Zellwänden in botanischen Kursen gerne verwendet. Safranin färbt aber in Wasser recht indifferent und muss mit 70% Ethanol oder besser Salzsäurealkohol differenziert werden. Ein Farbstoff der lignifzierte Zellwände spezifisch anfärbt und dazu noch die Cuticula ist das Chrysoidin und wo wir beim Spezifischen sind: Astrablau färbt nur nicht lignifizierte Zellwände an. Dieses machen wir uns alles zunutze und können mit einer vereinzelten Färbung jedes Zwischenergebnis gut kontrollieren.
Blattquerschnitt der Gemeinen Berberitze (Berberis vulgaris), gefärbt mit der SAC-Färbung. Präparation und Aufnahme von Rolf-Dieter Müller.
Vorgefärbt wird mit Safranin, die Färbezeit ist unkritisch und kann gerade bei dünnen Schnitten (ca. 30 µm und dünner) bis zu 30 Minuten betragen. Es wird somit deutlich und gewollt überfärbt.
Diese Überfärbung differenzieren wir mit Salzsäurealkohol. Der Aufenthalt in dieser Reagenz ist kurz, ungefähr 30 Sekunden bis zu einer Minute. Am besten wird der Fortschritt mit einer Lupe kontrolliert. Wenn keine Farbwolken mehr abgehen wird abgebrochen. Anschließend ist es wichtig, den Schnitt in Wasser sehr gut aus zu waschen. Jetzt haben wir erreicht, dass die lignifizierten Zellwände magentafarbig aussehen, nicht lignifizierte Zellwände sollten annähernd farblos sein.
Der Aufenthalt in Astrablau ist nur kurz und färbt nicht lignifizierte Zellwände spezifisch an.
Mit Chrysoidin kann ruhig wieder länger gefärbt werden. Eine Überfärbung wird mit der darauf folgenden Entwässerung in Isopropylalkohol zurückgenommen. Es legt sich über die Safraninfärbung und zeigt dann lignifizierte Zellstrukturen differenziert in Rot-Orangetönen. Zusätzlich wird auch die Cuticula angefärbt. Wie die Aufnahmen vom Blatt und Spross der Berberis vulgaris (Gewöhnliche Berberitze) und den anderen Beispielen weiter unten zeigen, entfaltet die SAC-Färbung ihre ganze Schönheit bei Schnitten, die vornehmlich lignifizierte Zellstrukturen haben.
Mit diesen kleinen Hinweisen und dem Arbeitsplan zum Herunterladen gelingen Ihnen Ihre eigenen SAC-Färbungen bestimmt. Sollte irgendetwas nicht wie erwartet ausfallen, so fragen Sie gerne über info(at)mikroskopie-bonn.de nach. Oder besser: kommen Sie zu unseren Färbeworkshops, die wir regelmäßig veranstalten und in denen Sie unter Anleitung botanische Schnitte färben können. Die nächsten Veranstaltungen finden Sie unter Termine auf dieser Webseite.
Beispiele zur SAC-Färbung
  • Ausschnitt aus einem Sprossquerschnitt von der Hasel (Corylus avellana) mit verstärkten Zellwänden im Xylem (Reaktionsholz). Färbung SAC, Präparation und Aufnahme von Jörg Weiß.
  • Ein Detail aus dem vorangegangenen Bild. Schön sind die Tracheen und Markstrahlen zu erkennen. Färbung SAC, Präparation und Aufnahme von Jörg Weiß.
  • Ausschnitt aus einem Sprossquerschnitt vom Echten Lorbeer (Laurus nobilis), hier tritt die Cuticula besonders prägnant hervor. Färbung SAC, Präparation und Aufnahme von Jörg Weiß.
  • Ausschnitt aus einem Sprossquerschnitt vom Flachblättrigen Mannstreu (Eryngium planum). Färbung SAC, Präparation und Aufnahme von Jörg Weiß.
Literatur
[1]  Arbeitsplan zur SAC-Färbung
      Rolf-Dieter Müller, MKB, 2011
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Einaugen-Muschelkrebs (Cypria opthalmica) von Horst-Dieter Döricht
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Dezember 2015
Dunkelfeldaufnahme vom Grünen Trompetentierchen (Stentor polyxmorphus); Aufnahme von Frank Fox
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Querschnitt durch das Blatt einer Welwitschie (Welwitschia mirabilis), Färbung W3Asim II; Aufnahme von Jörg Weiß
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Das Lilienhähnchen (Liliceris lilli) von Horst-Dieter Döricht
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Juli 2015
Schuppenhaare des Silbernen Grünrüsslers (Phyllobius argentatum). Foto von Horst-Dieter Döricht.
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Wachstumskegel an der Sprossspitze der Weinrebe (Vitis vinifera) im Präparat von Bodo Braunstorfinger. Foto von Jörg Weiß.
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Mai 2015
Ein Reusen-Rädertier von Frank Fox
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Die Diatomee Triceratium broeckii (Oamaru) in einer Aufnahme von Päule Heck
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Uroleptopsis roscoviana, ein roter Cilliat, Aufnahme von Frank Fox
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Februar 2015
Drei Konidien des Echten Mehltaus auf einem Weizenblatt mit Keimschläuchen und Appressorien, Aufnahme von Jörg Weiß
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Januar 2015
Sklerenchymband im Spross der Kiwi (Actinidia deliciosa), Aufnahme von Jörg Weiß
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Dezember 2014
Die Diatomee Auliscus convolutus (Alen's Farm, Oamaru), Aufnahme von Päule Heck
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Schale einer Diatomee im Interferenz-Phasenkontrast. Aufnahme von Frank Fox.
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Oktober 2014
Haare auf dem Brustpanzer einer Goldfliege (Lucilia sericata). Aufnahme von Horst-Dieter Döricht.
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September 2014
Stomagruben an der Blattunterseite eines frischen, unfixierten Schnittes des Oleanders (Nerium oleander) bei einer Vergrößerung von 200x. Aufnahme von Jörg Weiß.
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August 2014
Augen am Kopf einer Sprigspinne. Die Reflexe stammen von der Beleuchtung mit einem LED-Ringlicht. Aufnahme von Frank Fox.
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Juli 2014
Die Zieralge Micrasterias radians bei der Teilung. Aufnahme von Frank Fox.
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Mai 2014
Männlicher Eibenzapfen (Taxus baccata) mit Pollen von Horst-Dieter Döricht
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Spross des Efeus (Hedera helix) in W3Asim II - Färbung. Aufnahme mit einer Smartphone Kamera freihändig durch das Okular von einer Teilnehmerin der Lehrerfortbildung am Grotenbach Gymnasium Gummersbach.
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Maritimer Fadenwurm im Polarisationskontrast von Frank Fox
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Februar 2014
Ungefärbter Querschnitt durch das Blatt des Pampasgrases (Cortaderia selloana) von Jörg Weiß
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Parietin-Sublimation im freien Raum an Stahlwolle von Heike Buchmann
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Dezember 2013
Die Diatomee Hemiaulus proteus im Hellfeld von Päule Heck
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November 2013
Die Wimpernkugel Volvox aureus im Interphako von Frank Fox
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Zwei Algen der Art Micrasterias rotata, Aufnahme von Rudolf Krönung.
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Rückenschild und Flügelansätze der Grünen Futterwanze, Aufnahme von Horst-Dieter Döricht
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Mit W3Asim II gefärbter Querschnitt durch den Thallus eines Blasentangs (Fucus vesiculosus), Aufnahme von Jörg Weiß.
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Gelbe Blattwespe (Nematus tibialis), Aufnahme von Horst-Dieter Döricht.
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Juni 2013
Gold in der lamellaren Verwachsung von Kupferkies (gelb) und Bornit (rotbraun). Grube Hohlestein an der Eisernhardt, Siegen. Aufnahme Prof. Holger Adelmann.
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Mai 2013
Spinnenfaden bei 1000-facher Vergrößerung im DIC. Präparation und Schwarzweiß-Aufnahme von Anton Berg.
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Papyrus (Cyperus papyrus) ungefärbt in der Primärfluoreszenz. Präparation und Aufnahme von Rolf-Dieter Müller.
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März 2013
Diatomee im Interferenz-Phasenkontrast. Präparation und Aufnahme von Frank Fox.
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Februar 2013
Ungefärbter Querschnitt durch das Blatt einer Kamelie. Präparation und Aufnahme von Jörg Weiß.
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Januar 2013
Leitbündel aus dem Mittelstrang der Frucht eines Zitronenbaums (Citrus x limon). Das filigrane Präparat ist nur 7 µm dick und wurde von Anton Berg erstellt. Zum Vergleich: die meisten hier gezeigten botanischen Schnitte haben eine Dicke von ca. 50 µm. Aufnahme von Jörg Weiß.
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Dezember 2012
Anschliff einer Kohle aus der Grube Fürst Leopold in der Auflichtfluoreszenz; Anregung mit einer Wellenlänge von 470 nm. Aufnahme von Dr. Horst Wörmann.
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November 2012
Schwimmhaare auf der Blattoberseite eines tropischen Schwimmfarns aus der Familie Salvinia. Aufnahme von Frank Fox.
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Oktober 2012
Rezente Diatomee Bacteriastrum furcatum Shadbolt aus dem Golf von Thailand. Aufnahme von Päule Heck.
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September 2012
Die hier gezeigte Spaltöffnung aus Rhynie Chert Material ist 400 Millionen Jahre alt. Aufnahme von Holger Adelmann.
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August 2012
Eier einer Zuckmückenart (Chironomidae) im Phasenkontrast, Aufnahme von Frank Fox.
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Juli 2012
Porträt einer Frühen Adonislibelle (Pyrrhosoma nymphula), Aufnahme von Frank Fox.
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Juni 2012
Dünnschliff eines Quarzitschiefers aus den Italienischen Alpen, Dicke ca. 25 µm. Aufnahme von Holger Adelmann.
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Mai 2012
Tracheen im Xylem des Korallenbaums, Spross, Färbung W3Asim II, Vergrößerung 200x. Aufnahme von Jörg Weiß.
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April 2012
Porträt einer zwei Tage alten Fliegen. Aufnahme von Horst-Dieter Döricht.
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März 2012
Aus der Schmelze kristallisiertes Methylsulfonal im polarisierten Licht. Aufnahme von Frank Fox
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Februar 2012
Die Kieselalge Achnantes longipes. Aufnahme von Frank Fox
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Januar 2012
Primäres Xylem und Markparenchym aus dem Spross der Gewöhnlichen Jungfernrebe. Ungefärbtes Präparat, Aufnahme von Jörg Weiß.
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Dezember 2011
Flügelschuppen eines Großen Fuchses (Nymphalis polychloros) im Auflicht. Aufnahme Frank Fox.
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November 2011
'Dazu muss ich sagen, dass es mir nicht um irgendeine Form wissenschaftlicher Fotografie ging. Ich habe wilde Gemische hergestellt und dann nachgesehen, wie das Produkt aus sah. ... Genieß' das Spiel der Farben und Formen.' Aufnahme von Herne.
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Oktober 2011
Glockentierchen (Vorticellidae) im differenziellen Interferenzkontrast. Aufnahme von Frank Fox.
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September 2011
Die Radiolarie Hexacontium papillosum aus einem Präparat von Albert Elger. Aufnahme von Päule Heck.
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August 2011
Querschnitt durch den Spross des Gartenbambus (Fargesia murieliae). Vergrößerung 100x, Färbung W3Asim II. Aufnahme Jörg Weiß mit Leica C-Plan 10x an Leica DME. Kamera Canon PS A520.
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Juli 2011
Micrasterias rotata aus einer Wasserprobe von der Wuppertalsperre. Aufnahme Holger Adelmann mit der Moticam 2300 am Leitz Orthoplan mit 40er Plan Fluotar und DIC.
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Juni 2011
Bild 1
Angeschliffene Foraminifere aus einem Hydrobienkalk des Untermiozän. Fundort Dexheim bei Mainz. Präparation Fa. Krantz, Aufnahme Prof. Holger Adelmann.
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Juni 2011
Bild 2
Kopf mit Mundwerkzeugen und vorderes Körperdrittel einer nicht näher bestimmten Zuckmückenlarve (Chironomus sp.). Präparation und Aufnahme von Frank Fox.
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Mai 2011
Querschnitt vom Rollblatt des Strandhafers (Ammophila arenaria), Schnittdicke ca. 50 µm, Färbung Wacker W3A. Stitch aus 240 Einzelaufnahmen mit Zeiss Standard WL, Plan Apo 25x/0.65, Kamera Canon EOS 5D MK II mit Vollformat-Chip. Stitching mit Canon Photostitch.
Präparat von Jörg Weiß, Aufnahme von Joachim Schwanbeck.
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April 2011
Eidechsenschwanz (Houttuynia cordata), Abdruck von der Blattunterseite, erstellt mit UHU Hart. Hellfeld.
Vergrößerung 200x, Länge des Bildausschnitts im Objekt ca. 0,5 mm. Aufnahme und Präparation von Jörg Weiß.
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März 2011
Auskristallisierte Mineralstoffe aus flüssigem Kunstdünger. Zeiss Jenamed mit Planapochromat 12,4x CF250, polarisiert mit Lambda-Platte, Einzelaufnahme mit Vollformat-Kamera Canon 5D Mark II.  Aufnahme und Präparation von Frank Fox.
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Februar 2011
Nadelquerschnitt der Schlangenhaut-Kiefer (Pinus heldreichii). Aufnahme und Präparation von Rolf-Dieter Müller, Stitch aus ca. 70 Einzelbilder. Schnittdicke 25 µm, Färbung Wacker W3A (Acridinrot, Acriflavin, Astrablau).
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Januar 2011
Achtung, großes Bild!
Eidechsenschwanz (Houttuynia cordata), Leitbündel. Aufnahme von Prof. Holger Adelmann, Präparat von Jörg Weiß.
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Dezember 2010
Metapelit, Dicke ca. 25 µm, Präparation durch Willi Tschudin, Aufnahme von Dr. Horst Wörmann.
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November 2010
Simocephalus vetulus (Anomopoda), der Plattkopf- Wasserfloh. Aufnahme von Päule Heck.
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